Los anticuerpos anticitoplasma del neutrófilo (ANCA) son anti-cuerpos dirigidos contra gránulos primarios de neutrófilos y monocitos (1-2). Estos ANCA dirigidos contra la proteinasa 3 (PR3) y la mieloperoxidasa (MPO), están asociados con una forma distinta de vasculitis de vasos pequeños, conocida como vasculitis asociada a ANCA (AAV), término que engloba la granulomatosis con poliangeítis (GPA) y la poliangeítis microscópica (PAM). La detección estos ANCA es una prueba diagnóstica que se usa comúnmente para AAV. Según una declaración de consenso internacional emitida en 1999 (3,4), es recomendado utilizar la inmunofluorescencia indirecta (IFI) como método de cribado inicial para detectar la presencia de ANCA. Las muestras que resultan ser positivas por esta técnica deben analizarse nuevamente por inmunoensayos para detectar ANCA específicos para PR3 y MPO.
Aunque este algoritmo de prueba todavía se aplica ampliamente, la posición de IFI está siendo cuestionada.
Ya en el consenso de 2017, se recomienda el uso de inmunoensayos de alta calidad como el primer método de detección para la detección de ANCA en pacientes con una fuerte sospecha de GPA y PAM, incluyendo la recomendación de realizar un segundo ensayo para su confirmación. Es importante resaltar que en este consenso no fueron incluidas aquellas vasculitis que no están asociadas a ANCA (5).
Los patrones que pueden ser observados sobre neutrófilos humanos fijados sobre etanol en la IFI, corresponden al patrón C-ANCA que presenta un patrón de fluorescencia citoplasmático asociado a GPA y en la mayoría de los pacientes con anticuerpos dirigidos contra la proteinasa 3 (PR3) y un segundo patrón, el patrón P-ANCA que presenta un patrón de fluorescencia perinuclear indicando en su mayoría la presencia de anticuerpos contra la mieloperoxidasa (MPO) en pacientes con PAM. Los títulos obtenidos de ANCA a menudo se asocian con la actividad de GPA y PAM. Sin embargo, pueden llegar a encontrarse interferencias en la clara identificación de estos patrones cuando se observa también la presencia de anticuerpos antinucleares ANA formando un patrón atípico. Es por esto por lo que es importante incluir estos ANA en el algoritmo diagnóstico en compañía de inmunoensayos contra los antígenos específicos MPO y PR3 como lo sugiere el consenso del 2017.
Lograr realizar este conjunto de pruebas para brindar un resultado oportuno y confiable que logre orientar al clínico en el menor tiempo se ha convertido en un desafío para los laboratorios.
Para dar solución a esta necesidad, recientemente llega al mercado un novedoso sistema denominado CytoBead ANCA de la compañía GA Generic Assays GmbH, una prueba IIF convencional en un entorno de reacción que combina la detección de ANCA en etanol y su confirmación con inmunoensayos de microesferas, utilizando microesferas fluorescentes rojas recubiertas con antígenos recombinantes PR3 y MPO, respectivamente. Para lograr esto se diseñaron pozos triples en portaobjetos de vidrio para la fijación de neutrófilos en el compartimento central, así como microesferas recubiertas con PR3 y MPO en el compartimento derecho (Fig. 1).
Además, se inmoviliza en el compartimento derecho una población de microesferas de referencia con un tinte fluorescente emisor de verde que llena toda la microesfera. Por lo tanto, se pueden distinguir los halos de fluorescencia verde de diferentes tamaños de las microesferas recubiertas con PR3 y MPO teñidas positivamente. En general, los sueros positivos para PR3-ANCA muestran patrones de fluorescencia citoplasmática en etanol y un halo de fluorescencia verde en la superficie de las microesferas recubiertas con PR3 únicamente. Por el contrario, los sueros positivos para MPO-ANCA muestran patrones de fluorescencia perinuclear en etanol y un halo de fluorescencia verde en la superficie de las microesferas recubiertas de MPO. Para la automatización de este proceso, las intensidades de fluorescencia de los halos de fluorescencia se pueden cuantificar y ubicar simultáneamente en la población de microesferas adecuada mediante el sistema Aklides – akiron® NEO (6) aunque también es posible realizar este proceso de manera semicuantitativa con un microscopio tradicional para la lectura de IFI. Esta novedosa combinación en una sola fase de procesamiento que no supera las 2 horas representa una plataforma ideal para la detección de anticuerpos específicos de enfermedades autoinmunes como la vasculitis en corto tiempo.
Bibliografía.
1. Davies DJ, Moran JE, Niall JF, Ryan GB. Segmental necrotising glomerulonephritiswith antineutrophil antibody: Possible arbovirus etiology? Br Med J (Clin ResEd). 1982;285:606.
2. Romero, S. et al. Frecuencia de ANCA positivos en una población con síntomas clínicos sugestivos de enfermedad autoinmune y la interferencia de ANAen su interpretación. Reumatol Clin. 2018.
3. Savige, J. et al. International consensus statement on testing and reporting of antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA). Am. J. Clin. Pathol. 111, 507–513 (1999)
4. Am J Clin Pathol . 2003 Sep;120(3):312-8. doi: 10.1309/WAEP-ADW0-K4LP-UHFN
5. Bossuyt X, Cohen Tervaert JW, Arimura Y, Blockmans D, Flores-Suárez LF,Guillevin L, et al. Position paper: Revised 2017 international consensus ontesting of ANCAs in granulomatosis with polyangiitis and microscopic polyan-giitis. Nat Rev Rheumatol. 2017;13:683-92, http://dx.doi.org/10.1038/nrrheum.2017.140.39.
6. Sowa M, Grossmann K, Knutter I, Hiemann R, Rober N, Anderer U,et al. Simultaneous automated screening and confirmatory testing forvasculitis-specific ANCA. PLoS One. 2014;9:e107743, http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0107743.
