La hemostasia y la coagulación son las funciones principales de las plaquetas (PLT). La trombocitopenia es una causa común de hemorragia. Un recuento de PLT de 20 a 50×109/L puede indicar sangrado leve o quirúrgico. Si es inferior a 20×109/L, esto puede indicar un sangrado severo. Si se reduce a 5×109/L o menos, el paciente puede estar experimentando una afección potencialmente mortal.
El recuento exacto de plaquetas juega un papel vital en el diagnóstico y tratamiento de la hemorragia, especialmente cuando se considera la transfusión de plaquetas. Es esencial obtener recuentos de plaquetas precisos para garantizar el tratamiento y la intervención adecuados para los pacientes que experimentan estas afecciones. Existen varios métodos para determinar el recuento de plaquetas, incluido el examen microscópico, los analizadores hematológicos automatizados y el método de referencia internacional (IRM) basado en la citometría de flujo, recomendado por el Consejo Internacional de Normalización en Hematología (ICSH) [1] y la Sociedad Internacional de Laboratorio. Hematología (ISLH) [2].
El examen microscópico implica un recuento manual de plaquetas en un frotis de sangre periférica bajo un microscopio. Se utiliza de forma rutinaria para revisar los recuentos de plaquetas, especialmente cuando hay trombocitopenia u otros factores que interfieren con las plaquetas, como glóbulos rojos fragmentados o glóbulos rojos pequeños y plaquetas gigantes. Si bien la microscopía manual proporciona un enfoque visual y específico, esta técnica que requiere mucho tiempo es propensa a la imprecisión y a una confiabilidad deficiente [3].
La detección por inmunofluorescencia mediante citometría de flujo es el método de referencia internacional; sin embargo, su aplicación en laboratorios clínicos es limitada debido a varios factores, incluido el alto costo asociado con los reactivos e instrumentos, los desafíos de la estandarización, los requisitos que requieren alta mano de obra y la necesidad de personal altamente calificado y competente, lo que lo hace menos factible en comparación con los laboratorios modernos. Analizadores de hematología automatizados.
Los analizadores de hematología automatizados utilizan varios métodos de recuento de plaquetas, cada uno con sus distintas ventajas y limitaciones [4]. El método de impedancia (PLT-I) utilizado como método principal para el recuento de plaquetas; sin embargo, tiene limitaciones específicas [5]. Debido al uso de pulsos altos o bajos para identificar partículas grandes o pequeñas, PLT-I no puede distinguir partículas que sean similares en tamaño a las plaquetas [6]. En la práctica clínica, diversos factores que interfieren pueden provocar imprecisiones en el recuento de PLT-I; por ejemplo, los eritrocitos pequeños, los eritrocitos y los leucocitos fragmentados pueden provocar un aumento falso del recuento de plaquetas; Por otro lado, la agregación plaquetaria y las plaquetas gigantes pueden provocar una disminución falsa del recuento de plaquetas [7]. Para superar las limitaciones de PLT-I, varios fabricantes han desarrollado métodos adicionales para proporcionar una verificación precisa del recuento de plaquetas.
1. Método de impedancia convencional (PLT-I):
Las PLT y los glóbulos rojos (RBC) se pueden distinguir por la magnitud de la señal de impedancia eléctrica en muestras normales. Sin embargo, PLT-I está sujeto a la interferencia de eritrocitos microcíticos, fragmentos y PLT grandes cuando se utiliza para diferenciar PLT por volumen celular.
2. Método plaqueta hibrida (PLT-H(Hibrida)):
Desde el canal de impedancia, las PLT grandes son interferidas por fragmentos y eritrocitos microcíticos, pero las pequeñas no. Desde el canal DIFF, los glóbulos rojos se disuelven mediante reactivos específicos, la estructura de PLT permanece intacta y los PLT grandes se detectan mediante una metodología óptica precisa. Combinando los PLT pequeños del método de impedancia convencional y los grandes del método óptico, se obtendrá un recuento de PLT preciso.
Las series BC-700, BC-6000 y BC-6800 (MindrayBio-Medical Electronics Co., Ltd., Shenzhen, China) y las series XE y XN (Sysmex, Kobe, Japón) se han desarrollado basándose en el método óptico fluorescente. La incorporación de colorantes fluorescentes de ácido nucleico proporciona una mejor identificación de las plaquetas, lo que ayuda a minimizar la interferencia de los glóbulos rojos pequeños y los restos celulares [8]. Esta capacidad es particularmente ventajosa cuando se trata de recuentos bajos de plaquetas [9]. Actualmente, este método óptico fluorescente se está aplicando en la práctica clínica cuando se sospecha interferencia plaquetaria mediante el método PLT-I. Sin embargo, este método requiere nuevos canales físicos independientes (canal RET) y el uso de reactivos adicionales. Es crucial considerar el gasto adicional asociado con esta implementación. En la serie BC-700 se desarrolla un nuevo parámetro de recuento de plaquetas de costo cero, híbrido (PLT-H), (Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd., Shenzhen, Porcelana).
El método PLT-H es un algoritmo de recuento de plaquetas combinado entre el recuento de plaquetas pequeñas derivado del canal de impedancia y el recuento de plaquetas grandes derivado del canal DIFF, que ayuda a reducir la interferencia plaquetaria.
¿Cómo se ha podido verificar la correlación del manejo de este nuevo parámetro?
El estudio realizado en Tailandia se recogieron 405 muestras de PLT (excluidas las muestras de agregación). Según lo revelado por el examen microscópico, 200 muestras contenían factores de interferencia, incluidos PLT grandes, eritrocitos microcíticos y fragmentos de eritrocitos. Los PLT fueron detectados por los citómetros de flujo de dos casas comerciales, respectivamente este analizador que tiene la tecnología. PLT-H tuvo una buena correlación con la citometría de flujo (r=0,9873, y=1,0179x+5,0894). [10].
¿Cómo desde el laboratorio podemos realizar la correlación de la PLT-H?
Estudio de caso clínico 1: Paciente con leucemia linfoblástica aguda, hospitalizado durante 11 meses, estaba recibiendo quimioterapia y preparándose para un trasplante de médula ósea.
Se obtienen los siguientes resultados observando alteraciones en los histogramas de plaquetas por impedancia (PLT-I) vs. plaquetas hibridas (PLT-H)
CONTEOS OBTENIDOS MODO CBC
RBC 3.23×1012/L
HGB 87g/L
MCV 76.7fL
RFC% 7.5% Fragmentos Glóbulos Rojos
PLT-I 77×10⁹/L PLAQUETA ANALISIS IMPEDANCIA
PLT-H 29×10⁹/L PLAQUETA HIBRIDA
El examen microscópico reveló fragmentos evidentes de glóbulos rojos (Fragmentados) en varios campos observados con estos hallazgos se puede concluir en este caso del paciente la importancia de correlacionar los datos que se obtienen del analizador de hematología vs. el comportamiento de las gráficas, alarmas y su posterior revisión morfología.
El recuento de PLT medido por citometría de flujo fue de 27X109/L, lo que fue consistente con el de PLT-H.
En este caso, se activó una alarma de fragmentos de glóbulos rojos en el instrumento y el valor del parámetro FRC (fragmentos de células eritroides Esquistocitos) fue del 7,5 %. La terminación del histograma de PLT estaba elevada, lo que sugiere que pueden estar presentes fragmentos de glóbulos rojos en esta muestra, lo que indicaría un valor alto falso en PLT. Durante la quimioterapia, los pacientes suelen presentar una disminución de las células sanguíneas enteras y un aumento de la fragilidad celular. A pesar de la presencia de fragmentos de glóbulos rojos, PLT-H puede medir con precisión el recuento de PLT y controlar el riesgo de hemorragia de manera oportuna.
Desde el canal de impedancia, las PLT grandes son interferidas por fragmentos y eritrocitos microcíticos, pero las pequeñas no. Desde el canal DIFF, los glóbulos rojos se disuelven mediante reactivos específicos, la estructura de PLT permanece intacta y los PLT grandes se detectan mediante una metodología óptica precisa. Combinando los PLT pequeños del método de impedancia convencional y los grandes del método óptico, se obtendrá un recuento de PLT preciso.
Bibliografía
- Briggs C, Harrison P, Machin SJ. Continuing developments with the automated platelet count. Int J Lab Hematol 2007;29:77–91.
- International Council for Standardization in Hematology Expert Panel on Cytometry, International Society of Laboratory Hematology Task Force on Platelet Counting. Platelet counting by the RBC/platelet ratio method. A reference method. Am J Clin Pathol 2001;115:460–4.
- Anchinmane V, Sankhe S. Utility of peripheral blood smear in platelet count estimation. Int J Res Med Sci 2019;7:434–7.
- Gulati G, Uppal G, Gong J. Unreliable automated complete blood count results: causes, recognition, and resolution. Ann Lab Med 2022;42: 515–30.
- Tantanate C, Khowawisetsut L, Pattanapanyasat K. Performance evaluation of automated impedance and optical fluorescence platelet counts compared with international reference method in patients with Thalassemia. Arch Pathol Lab Med 2017;141:
- Zandecki M, Genevieve F, Gerard J, Godon A. Spurious counts, and spurious results on haematology analyzer’s: a review. Part I: Platelets. Int J Lab Hematol 2007;29:4–20.
- Baccini V, Genevieve F, Jacqmin H, Chatelain B, Girard S, Wuilleme S, et al. Platelet counting: ugly traps and good advice. Proposals from the French-Speaking Cellular Hematology Group (GFHC). J Clin Med 2020;9:808
- Sun Y, Hu Z, Huang Z, Chen H, Qin S, Jianing Z, et al. Compare the accuracy and precision of Coulter LH780, Mindray BC-6000 Plus, and Sysmex XN-9000 with the international reference flow cytometric method in platelet counting. PLoS One 2019;14:e0217298.
- Kim H, Hur M, Lee GH, Kim SW, Moon HW, Yun YM. Performance of platelet counting in thrombocytopenic samples: comparison between Mindray BC-6800Plus and Sysmex XN-9000. Diagnostics 2021;12:68.
- P/N: ENG-PLT-H: PLT-H: A new parameter for accurate platelet counting with anti-interference ability -210X5P-20220810
